溶菌酶提取技术

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溶菌酶是一种制药原料可以从禽类蛋壳提取。提取溶菌酶技术掌握好了，经济效益很高，也有人比作“吃蛋不用还钱的技术，一点也不夸张。
1.原料：各种蛋壳，包括新鲜的，冰冻的蛋壳
2.试剂：氯化钠.盐酸.氢氧化钠.氯化钙.醋酸.聚丙烯酸（分子量6~8）.硫酸。
3.设备：水罐.铝锅.罐头瓶 大众网赚论坛www.dzhon88.com
4.工艺流程：
一.蛋壳膜提取工艺：（1）将蛋壳用循环水冲洗后粉碎，加入1.5倍的0.5%氯化钠的溶液，用2当量盐酸调pH值至3，在40度下搅拌提取15分钟后用细布过滤。滤渣再如上法提取2次，合并前两次滤液，第三次滤液作下批提取用。
（2）选择性热变性及等电点沉淀：将提取液用2当量盐酸调pH值至3，于沸水锅中迅速升温至80度，随即搅拌冷却，再用醋酸调pH值至4.6促使**白在等电点沉淀.离心或”吊滤“。
（3）聚丙烯酸凝聚：清液用.氢氧化钠溶液调pH值至6.加入清液体积一半量的5%聚丙烯酸（此时pH值在3），搅均静止15分钟，去掉上层混浊液，得粘附于瓶底的溶菌酶，即聚丙烯酸凝聚物。
（4）凝聚物解离：凝聚物悬于水中，加氢氧化钠溶液调pH值至9，使凝聚物溶解，再加入聚丙烯酸用量1/25的50%氯化钙溶液，使溶菌酶解离。用2当量盐酸调pH值至6，离心分离上清液。沉淀可用硫酸处理后除去硫酸钙沉淀，回收聚丙烯酸。
（5）结晶：清液用氢氧化钠溶液调pH值至9.5，离心除去氢氧化钙沉淀。上清液加入氯化钠至5%，静置结晶。收率约为1%。
二.蛋清提取工艺：
（1）吸附，将新鲜货冰冻蛋清(货蛋壳水）540公斤，解冻后通过筛网去杂质，在5~10度加入处理好的724树脂80公斤（pH值6.5），搅拌吸附6小时，低温静置过夜。
（2）洗涤倾出上层清液。树脂离心甩干，用蒸馏水反复洗去粘附的蛋白液，装入桶内，用0.15M、pH值6.5磷酸缓冲液150升洗涤 树脂，然后用500升10%硫酸铵洗涤，流速控制在每小时50升左右，收集洗涤过的液体。
（3）硫酸铵盐析。洗涤过液体按体积补加硫酸铵，使最终含硫酸铵量为40%，此时有白色沉淀产生，冷处放置过夜。
（4）透析.去碱性蛋白。次日虹吸上层清液，沉淀吸滤抽干。盐析物用1倍量蒸馏水溶解成稀糊状，装入透析袋。在5度左右时将蒸馏水透析24小时左右，换水2~3次，再离心，除沉淀。合拼洗涤液和离心液。
（5）冷冻干燥。向透析清液慢慢加入1当量氢氧化钠溶液，同时不断搅拌，使pH值上升到8~9，如有白色沉淀，立即离心除去，然后用3当量盐酸pH值至5，冷冻干燥，即得白色状溶菌酶。收率，一公斤蛋清2.5~3克，一公斤蛋壳水1~1.5克。
（6）注意事项：A.蛋清的收集，pH值应在8~9，防止杂质和蛋黄的掺入，以免影响树脂的吸附能力。B.操作全过程要在0~10度进行，以防止蛋清发酸变质和酶的失活。C.树脂再生，转型要彻底，转为钠型后用0.15M.pH值6.5磷酸缓冲液平衡过夜。平衡液的pH值应保持在6.5，否则应用氢氧化钠调整。D.近来报道，用苯乙烯大孔径离子交换吸附型树脂进行溶菌酶的制备，比沿用的724树脂效果好。应该树脂既要有专一吸附的优点，有具有离子交换和机械较强的特性。

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